par Fernando Rubio, Lori fields et Thomas Glaze, Eurofins Abraxis, USA
Le glyphosate ou N-glycine (figure 1) est l'herbicide à large spectre utilisé largement dans le monde, représentant environ 25% des parts de marché mondial.
Composé d'organophosphore (phosphonate), il a été découvert pour la première fois comme un herbicide par Monsanto et a été introduit sur le marché en 1974 sous le nom commercial «Roundup». Le glyphosate est parfois appliqué sur l'orge, le blé et d'autres cultures en tant qu'agent de séchage avant la récolte pour accélérer les opérations de récolte.
Bien que les formulations de glyphosate telles que Roundup aient été approuvées par des organismes de réglementation du monde entier, les préoccupations concernant leurs effets sur les humains et l'environnement persistent. Des résultats contradictoires sur les risques cancérogènes ont propulsé le glyphosate au centre du différend opposant des responsables politiques, des régulateurs et des chercheurs européens et américains.
En mars 2015, le Centre international de recherche sur le cancer de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) a classé le glyphosate comme «probablement cancérogène pour l'homme» (catégorie 2A) sur la base d'études épidémiologiques, animales et in vitro. En novembre 2015, toutefois, l'Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA) a publié un rapport concluant qu '«il était peu probable que le glyphosate soit génotoxique ou constituerait une menace cancérogène pour l'homme».
Au milieu de ces informations contradictoires, en juin 2016, la Commission européenne n'a pas pu se mettre d'accord sur le réenregistrement du glyphosate avant 15 ans. Au lieu de cela, il a accordé une prolongation de licence temporaire dans l'attente d'études scientifiques supplémentaires. Alors que le débat scientifique se poursuit, les préoccupations des consommateurs concernant le glyphosate dans la chaîne alimentaire grandissent. L'EPA (40 CFR Part 180) a établi des tolérances pour divers produits, dont les céréales: gruau, blé et orge à 30 ppm ou 30 000 ng / g, mais les normes biologiques applicables à certains produits ne dépassent pas 10 ppb (10 ng / g).
L'analyse du glyphosate dans les matrices environnementales est souvent problématique car il s'agit d'une petite molécule présentant une similitude structurelle avec de nombreux matériaux végétaux naturels tels que les acides aminés et les composés végétaux secondaires. Sa solubilité élevée dans l'eau rend l'extraction par solvant difficile, posant un grave problème aux chimistes qui doivent éliminer les effets de matrice avant l'analyse instrumentale. De plus, les matrices de plantes et de sols contiennent des co-contaminants qui augmentent la complexité de la préparation des échantillons et rendent l'analyse instrumentale plus coûteuse et plus longue.
Le dosage immunoenzymatique (ELISA) est une technique analytique largement utilisée depuis des décennies dans diverses applications cliniques et industrielles, telles que le sang, l'eau, les mycotoxines, les agents pathogènes, etc. pour échantillonner les matrices de manière rapide, précise et rentable.
Cette étude évalue le kit de test ELISA Eurofins Abraxis Glyphosate (numéro de pièce 500086, voir Figure 2), un kit de test ELISA du commerce destiné à l'analyse quantitative du glyphosate, afin d'obtenir des résultats de prélèvement en trois à quatre heures prise sur site pour les applications d'essais agricoles.
Reproductibilité
Douze échantillons de blé dur brut avec des concentrations inconnues de glyphosate ont été obtenus pour cette étude. Un sous-échantillon de 0,5 g de chaque échantillon de blé dur brut a été broyé et extrait dans trois fois 10 ml d'eau désionisée conformément au protocole décrit dans le bulletin technique Eurofins Abraxis, intitulé «Glyphosate dans l'avoine, le blé et l'orge».
Des copies de tous les extraits d'échantillons, standards et contrôles ont ensuite été dérivatisées et analysées selon les instructions du kit de test sur un seul lot de plaques de test Glyphosate ELISA (référence 500086), pour un total de 72 résultats. Les données sont présentées dans le tableau 1.
Il a été déterminé que la concentration de glyphosate était inférieure à la limite détectable dans un échantillon (n ° 5) (<7,5 ng / g). Il a été déterminé que tous les autres échantillons avaient des concentrations de glyphosate comprises entre 12 et 739 ng / g. Le pourcentage de CV entre les trois extraits pour chaque échantillon variait de 2,3% à 27,4%. Un seul des douze échantillons présentait un pourcentage CV supérieur à 20% sur les trois extraits, indiquant une excellente reproductibilité du test.
Les données tracées entre deux analyses ELISA distinctes d'extraits d'échantillons de blé dur provenant du même échantillon de blé dur brut (voir le tableau 2) ont révélé une excellente corrélation entre elles, comme l'indique la figure 3, la valeur de r2 entre les deux analyses étant de 0,991.
Récupération
Des doublons d'extraits d'échantillons de blé dur précédemment déterminés par ELISA comme ayant une concentration équivalente de glyphosate inférieure aux limites de dosage détectables (<7,5 ng / g) ont été additionnés d'une quantité connue de glyphosate (0,5 ng / g d'équivalent).
Des doubles d'un autre échantillon de blé dur brut précédemment déterminé par une analyse de dosage de glyphosate de 21,5 ng / g par ELISA ont également été enrichis avec 0,5 ng / g de glyphosate. Un test de pointe de 0,5 ng / mL a également été préparé avec de l'eau déminéralisée (LOQ dans l'eau = 0,05 ng / mL) afin d'évaluer les éventuels effets matriciels sur la récupération de l'échantillon.
Tous les extraits d'échantillons enrichis, les contrôles, les étalons et les contrôles d'eau déminéralisée ont ensuite été dérivatisés et analysés comme décrit dans le bulletin technique Eurofins Abraxis, «Glyphosate dans l'avoine, le blé et l'orge» et le kit de test de glyphosate.
Comme indiqué dans le tableau 3, la concentration moyenne des extraits enrichis a été déterminée à 0,486 et 0,518 ng / g respectivement. En comparant la concentration de l'échantillon broyé et extrait à la concentration enrichie de 0,5 ng / g d'équivalent glyphosate, la récupération de l'échantillon a été déterminée à 97-103%.
Conclusion
Le kit de test ELISA Eurofins Abraxis Glyphosate est capable d'analyser des échantillons de blé dur pour en déterminer les concentrations en glyphosate. L'évaluation des kits de test pour cette application suggère que les données sont à la fois reproductibles et précises. Le pourcentage de CV était inférieur à 20% sur trois extraits d'échantillons du même échantillon de blé dur préparés et analysés séparément selon les instructions du kit. La corrélation entre les analyses ELISA était supérieure à 0,990. De même, le test a démontré une bonne récupération des échantillons enrichis avec un pourcentage de récupération compris entre 97% et 103%.
